使用人肌酸激酶（CK）ELISA试剂盒进行体外检测时，为确保结果的准确性与重复性，需严格遵循实验规范。以下为关键操作注意事项，供实验室人员参考。
一、试剂准备阶段
所有试剂使用前应平衡至室温（20–25℃），避免因温度差异影响反应效率。特别是酶结合物和显色液，低温状态下可能导致活性下降或反应延迟。微孔板取出后应立即密封保存剩余板条，防止受潮或污染。配置洗涤液时，需按说明书比例用蒸馏水或去离子水稀释，并确认无结晶残留。
二、样本处理要求
血清或血浆样本应新鲜采集，避免溶血，因红细胞内含高浓度CK，溶血可能导致检测值偏高。样本若不能及时检测，应分装后于-20℃以下避光保存，避免反复冻融。检测前充分混匀，必要时按要求进行预稀释，以保证结果在标准曲线线性范围内。
三、加样与孵育控制
加样时保持移液器垂直，避免气泡产生。建议使用多通道移液器提高效率与一致性。标准品和样本均应设复孔，减少偶然误差。封板后置于恒温环境中孵育，避免温度波动或震荡干扰抗原抗体结合过程。
四、洗板操作要点
洗涤步骤至关重要，未结合物质清除不彻底将导致背景升高。推荐使用自动洗板机，若手动操作，应确保每孔充满洗涤液并充分浸泡后甩干，连续冲洗3–5次。最后一次拍干应彻底，但避免交叉污染。
五、显色与终止
显色反应需避光进行，时间应严格控制，过长可能导致信号饱和。加入终止液后轻轻震荡混匀，使颜色均匀转化。应在规定时间内完成读数，防止颜色漂移影响吸光度值。
六、仪器与数据管理
酶标仪使用前需校准波长（通常为450nm），设定参考波长（如630nm）扣除背景干扰。实验数据应及时记录并备份，建议保留原始OD值以便追溯。
遵循上述操作要点，有助于提升检测系统的稳定性与可信度，为科研工作提供可靠的数据支持。
